怎样冷冻保存蛋白胨细胞

蛋白胨细胞的冷冻保存一直是生物科技以及医疗行业的难题，如何克服冷冻过程中的种种弊端，科学合理的冷冻蛋白胨细胞一直是业内人士追求的课题，其实蛋白胨细胞的冷冻技术也并不复杂。

关于蛋白胨细胞的冷冻保存方法如下：

1·传统方法: 冷存管置于4℃10分钟--->-20℃30分钟--->-80℃16～18小时(或隔夜)--->液氮槽vaporphase长期储存。-20℃不可**过1小时，以防止胞内冰晶过大，造成蛋白胨细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

2·程序降温：利用已设定程序的等速降温机以-1～-3℃/分钟之速度由室温降至(-80℃以下)-120℃，再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。

冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基，使细胞处于指数生长期。

配制冷冻保存溶液(使用前配制)：另取一离心管，加入培养基、血清，逐滴加入二甲基亚砜(DMSO)至20%浓度，即制成双倍的冻存液，置于室温下待用。

离心收集培养之细胞，用加血清的培养基重悬起细胞，取少量细胞悬浮液(约0.1ml)计数细胞浓度及冻前存活率。

取与蛋白胨细胞悬液等量的冻存液，缓慢逐滴加入细胞悬液，并晃动试管，制成细胞冻存悬液(DMSO最后浓度为5～10%)，使细胞浓度为1～5×106cells/ml，混合均匀，分装于已标示完全之冷冻保存管中，1～2mlial，并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后，注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。